从衰老细胞到组织的功能恢复

细胞周期阻滞是细胞衰老的核心特征，SenoReverse™逆转的正是这一阻滞。给药后，细胞和自然老龄小鼠的衰老标志物都低于对照；小鼠的端粒长度还向年轻水平恢复，功能改善，中位寿命延长。

干预衰老细胞的四种路径

  1. 清除

    Senolytics选择性清除衰老细胞。

  2. 调节

    Senomorphics调节衰老相关分泌表型（SASP）与炎症。

  3. 重编程

    部分重编程短暂诱导重编程因子表达。

  4. 恢复

    SenoReverse™逆转周期阻滞，恢复原有细胞的功能，不改变细胞身份。

衰老细胞恢复周期活动

衰老细胞中，两个细胞周期抑制因子持续累积，使细胞停滞在G1检查点。SenoReverse™降低这两个因子，阻滞随之解除，细胞周期恢复正常调控。

我们分选出衰老细胞并给药，以活细胞成像同步追踪给药组与未给药的对照组；给药组细胞恢复了周期活动。

对照
给药

活细胞成像：给药组与对照组同步记录。

绿色为p21报告荧光，提示衰老相关的周期阻滞。给药组荧光减弱，红圈标出恢复功能、回到正常周期的细胞；对照组荧光逐渐增强。

单细胞测序：给药组仍处于衰老状态的细胞比例约为对照组的一半（16.0%对33.2%）。

复制性衰老模型中的标志物

IMR90人成纤维细胞，干预72小时。只示方向。

p16

转录水平下降

p21

转录水平下降

SA-β-gal

阳性率下降

Ki67

阳性率上升

  • 活细胞追踪：人源衰老报告细胞系经阿霉素（Dox）处理48小时、正常培养10天后，分选出报告阳性细胞，给药组与未给药的对照组同步动态追踪。
  • 复制性衰老：以群体倍增水平（PDL）为30和50的IMR90细胞分别作为年轻参照和衰老模型，干预72小时。p16/p21转录每组n=3；SA-β-gal每组6次独立生物学重复；Ki67每组3次独立重复。
  • DNA损伤与染色质：γH2AX下降，H3K9me3恢复上升。
  • 给药后，CCNG2（小鼠为Ccng2）的表达在所研究的衰老细胞和自然老龄小鼠组织中下降。
  • 结合位点报告实验（两个靶点）：野生型位点的报告活性低于载体对照，突变型高于对应的野生型，支持两个靶点均受序列特异性调控。
  • 单细胞测序（分选出的衰老细胞，处理3天）：处于衰老状态的细胞，给药组16.0%、对照组33.2%；处于恢复状态的，给药组34.5%、对照组18.4%。

老龄小鼠组织趋向年轻

自然老龄小鼠皮肤中，两种检测方法均显示给药组端粒长度向年轻水平恢复，肝组织变化方向一致；五个组织的SA-β-gal阳性面积减小，四项血清炎症因子降低。

端粒长度

年轻参照、老龄对照与给药组为不同动物。只示方向，非实际比例。

SA-β-gal阳性面积

肾、肝、肺、脾、皮肤五个组织均下降

血清炎症因子

IL-1β、IL-6、IFN-γ与TNF-α下降

  • 皮肤端粒长度：qPCR与TRF/Southern blot两种方法均显示，给药组长于老龄对照、更接近年轻参照；肝组织变化方向一致。年轻参照、老龄对照、给药三组是不同的动物，不是同一只动物的三个时点。
  • SA-β-gal阳性面积（肾、肝、肺、脾、皮肤）：雄性小鼠，25月龄起每两周给药，30月龄检测，每组n=10。
  • 血清炎症因子（ELISA）：IL-1β、IL-6、IFN-γ下降（P<0.001），TNF-α下降（P<0.01）。雄性小鼠，25月龄起每两周给药，30月龄检测，每组n=10，均值±SEM，Student t检验。
  • 组织转录组（肝、肾、肺、皮肤，每组n=3）：与老龄对照相比，给药组细胞周期相关通路上调、炎症相关通路下调，方向与12月龄的年轻小鼠一致。

自然老龄小鼠寿命延长

长期重复给药的后续研究中，中位寿命延长38.2%；采用相同方法的前期研究中，小鼠自20月龄起每两周给药、直至自然死亡，给药组中位寿命1,029天，对照组892天（+15.4%）。

38.2%

长期重复给药，中位寿命延长

前期研究 · 中位寿命

  • 前期研究：20月龄起每两周给药至自然死亡；每组80只（雌雄各40只），设同期对照。
  • 中位寿命：给药组1,029天，对照组892天（+137天，+15.4%）；风险比（HR）0.38（95% CI 0.27～0.53），P<0.001。
  • 最大寿命（各组最长寿的15%小鼠）：给药组比对照组长12.13%。
  • 中位寿命按总寿命计算，不是首次给药后的剩余寿命。
  • 前期研究的尸检病理显示，给药组的肿瘤和疾病负担未高于对照组，死因分布相似。
  • 38.2%来自沿用相同方法、长期重复给药的后续研究；两项研究的结果不合并。

老龄小鼠的力量、协调与记忆改善

给药后，老龄小鼠握力恢复，在加速转棒上坚持更久，在水迷宫中更快找到平台、在目标象限停留更久，体重也维持得更好。

给药组对照组

自然老龄雄性小鼠的组均值示意趋势，每月评估。水迷宫逃避潜伏期已倒置显示，各图均越高越好；非实际比例。

握力
25月龄30月龄

先恢复，后期高于同期对照

运动协调
25月龄30月龄

在加速转棒上坚持更久

学习
25月龄30月龄

更快找到水迷宫平台

记忆
25月龄30月龄

在目标象限停留更久

体重
25月龄30月龄

老龄阶段维持得更好

  • 自然老龄雄性小鼠，25至30月龄每两周给药；每项指标每组n=10，每月评估，对照为同期老龄对照。功能研究与寿命研究相互独立。
  • 握力：按体重归一化。
  • 加速转棒：300秒内由8 rpm加速至80 rpm，记录掉落时间。
  • 水迷宫：逃避潜伏期（即寻台时间，反映学习）与目标象限停留时间（反映记忆）。
  • 体重：研究期间纵向记录。

老龄非人灵长类的早期信号

研究对象为自然老龄、伴自发性2型糖尿病的食蟹猴（给药4只、对照3只）。中期结果显示，给药组认知改善、对照组下降；空腹与餐前血糖、甘油三酯、ALT与AST在给药组下降、对照组上升。

给药组对照组

中期结果，只示方向。认知为基线至约2个月，血液指标为6～7周。

认知

血糖

血脂

肝酶

  • 研究对象：自然老龄、伴自发性2型糖尿病的食蟹猴，给药4只、对照3只；完成DMTS认知测试的为给药3只、对照2只。各指标观察期不同。中期结果，样本小。
  • 两组同向变化：自发活动均上升（基线至2周）；糖化血红蛋白（HbA1c）、空腹胰岛素与HOMA-IR（由组均值计算）均下降（6周）。
  • 血清肌酐：给药组上升、对照组下降（6周）。基线偏低；是否与肌肉有关，尚需直接测量。
  • 白蛋白：给药组轻微上升、对照组下降（6周）。
  • 总胆固醇：给药组保持稳定、对照组恶化（6周）。
  • 尿酸：给药组轻微上升、对照组下降（6周），原因未验证。
  • 体重：无统计学显著变化（7周）。
  • 电解质（K、Na、Cl、Ca、P、Mg）：仅记录观察期内的范围，无基线至终点的趋势。

进入人体研究

以下为两个优先项目和ALS在研究者发起的临床研究（IIT）中的进展。

肌少症
IIT已获医院伦理批准；FDA IND申报正在推进，为Ⅰ期临床试验做准备。
雄激素性脱发
IIT已读出结果：毛发密度、毛囊单位密度等终点较对照改善；同样在推进FDA IND申报，以开展Ⅰ期临床试验。
ALS
早期IIT已完成，初步结果显示功能改善、神经丝轻链（NfL）下降。

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